Metoda lêkolînên genetîk Molecular

Ku ce'sûsîya û tespîtkirina Guhertoyên li awayê avahiya DNA tê bikaranîn gerdî genetîk. Ji bo her herêmê DNA, ku xurtbûn vê herêmê ji chromosome, gene an allele, bi rêbazên cuda ne. Divê, her rêbaza genetîk gerdî birîtî ye hinek an manîpulasyonê din ji RNA û DNA. Hemû van rêbazên bi destê an Tevlihevî êsh bilêv, bê şert û mercên laboratuar dikarin derve ne bê lidarxistin, û bi personel re divê pir bi kalîte be. Ev kar tê kirin di çend qonaxan de hatiye lidarxistin.

qonaxên

Yekem, testa RNA an DNA ji bo bêne hilberandin. Li vir, bi rêbaza genetîk gerdî dikare ji bo hema hema ti maddî pêk anîn: a dilopa xwîna xwe, leukocytes, fibroblasts çand, tifê jî (bi tampona), heta hair follicles de, - DNA dikare ji hemû nimûneyên bidestxistin. Ev minasib bi kar ti rêbazên genetîk gerdî û vebijêrkên curbicur wan e û ji DNA dirêj îzole frozen tomarbûye. Qonaxa duwem ya ku li kombûna pariyên xwestin (amplification) ji DNA diyarî, wekî ku alîkarî dike, da ku berteka zincîra polymerase li vitro (li vitro bêyî tevlêbûna dijîn organism). Di encama vê çalakiyê de hatiye hilbijartin fragment DNA carbicar bi vê berteka zincîrê, û li gorî mêjera di rastiya xwe de bi milyonan caran DNA zêde dibe.

Di qonaxa sêyem ku di metodên lêkolînan genetîk gerdî texmînkirin sinorkirina carandin DNA (ev parçebûna, neçirîne, an tûje). Restriction li ser polyacrylamide an gel agarose ji aliyê electrophoresis. Ev rêbaza gerdî-genetîk ên dixwînin fragment DNA ya destûrê dide her kesî ku rewşeke taybet di gel. Piştî wê, li gel ku bi bromî ethidium dermankirin, dikarin ji girêdidan ji bo DNA, di Tîrêjkirin bi ronahiya ultraviyole, hingê mumkin e ji bo çavdêriya beşên luminescence. rêbazên pişkinînan genetîk Molecular rûdaye û gelek in, lê du gavên yekem ji bo hemûyan hevpar in. Lê belê, ji bo ku nasnameya pariyên DNA, ku gel dikare bi reng, û gelek din rêbazên heyî.

cureyên

Rêbazên herî rasterast û berbelav ya ji bo naskirina mycobacteria dibe ku metoda hînbûna DNA genetîk gerdî jor. naveroka wê ew e ku, ji bo ku nasnameya maddî zincîra lêgerîneke pariyên hûrbûyî yên taybetî yên DNA ji arkeayan. teknîkên teşxîsa genetîk Molecular hê bi awayekî efektîv zêdetir nas van nexweşiyên wek êşa zirav heye ne. Bikaranîna berteka zincîra polymerase (enzîm), tu bawer bin ku DNA orjînal dê hejmara kopiyên li milyon caran zêde bibe, ku ye, li wê derê amplification, û ew dê encamên hegera. bêtir ji not û pênc ji sedî, ku sûd sereke ya vê rêbazê - The asta hestiyariya pir bilind e.

Ya mayî bi rêbazên gerdî-genetîk yên lêkolînan li ser bandora deqekê kopî multiple di rastiya xwe de du qat, ji ber ku di vê rewşê de testa dariştina de nîşan dide cihekê oligonucleotide taybetî ji bo sed û şeş car zêde bûye. Even ku teşhîs çand zirav ya pergala respiratory girîng hestiyariya xwe kêm bikin. Ev e, çima derman modern li ser rêbazên genetîk gerdî teşhîs yên zirav bingeha. A awayê şirovekirî bi bandor e, bi taybetî jî dema ku mijûlbûna bi arkeayan ji Jorawjorí antigenic bilind, diyar kir ku bi awayekî din e, pir zehmet zêdetir - pêwîstî bi taybetî medyaya vezîvirana û belave demeke dirêj. rêbazên genetîk Biochemical û gerdî bandora pir cuda li ser encamên.

teşhîs yên zirav

teşhîs Marshall enzîm yên zirav herî bikaranîna wan Rêzkirinên li DNA ku bi taybetî ji bo her çar cureyên vê nexweşiyê ne. Bo gihiştina bi vê armanca caran bi kar astaran ku jixweber cihekê IS hêmanên (IS-986, IS-6110), wek ku ev element ravekirina cureyên pir koçkirî zirav Mycobacterium û her tim kopî multiple niha di genên. Bi derxistina DNA dikare ji çand û pak û klînîk (tavêje nexweşan) bi awayekî minasib din hatiye lidarxistin. Ji bo nimûne, rêbaza Boom hene, ku tampon lysis e ku li ser bingeha thiocyanate guanidine û kokk wek DNA carrier bikaranîn. Hejmara kesên nexweş yên ku cuda bacteriological belengaz zêdebûna her sal, û ji ber vê yekê di pratîkê de klînîkî de di asta bi temamî cuda yên rêxistina xwe ava kiriye: method gerdî-genetîk ên dixwînin DNA hatiye dîtin fikirîba rolekî mezin di tespîtkirina.

Lê belê, divê em bipejirînin ku ew e, bêyî ku nakin. Metoda enzîm e bikaranîna caran tîne jimareke mezin ya encamên derewîn-erênî, û ji ber ne bi tenê dikarî çewtiyên teknîkî, lê her ku taybetmendiyên rêbaza xwe ye. Li gel vê, bi bikaranîna vê rêbazê ji teşhîs ji bo destnîşankirina pelgehan mycobacteria, ku nasnameya wî kirin, ew e, tiştekî nepêkan e. Lê belê ev dezavantajek e ya herî girîng ne. rêbazên genetîk Molecular ji Sedema enzîm bi wateya rîska têkelbûna ji DNA mycobacterial. daxwazên sepandin û ji bo vê yekê ji bo taqîgehan û enzîm dîzaynkirin dayikî zehmet, ji bo wan pêwîst sê palpifltên cuda. teknolojiya enzîm modern û pir aloz e, lê pêwîstî bi bikaranîna amûrên guncaw û karmendên bilind-perwerdekirin.

bacterioscopy

Dema ku encamên muayeneyên ji analîzên divê bi daneyên din werin berhevdan: muayene klînîkî, Radiography, Microscopy lekeyê de, berhem û heta bersiv bo tedawiya taybet pir girîng in. Di vê series, xebatên enzîm e bi tenê yek ji pêkhateyên. Tesbîtkirina li mîkrorganîzma di destpêka nasîna dikarin herî hêsan û zû rêbazên - bacteriological.

tê bikaranîn, mîkroskop, ronahî (coloring Ziehl-Neelsen) û têlên (coloring fluorochromes) hene. Avantaja speed lekeyê de encamên e. Lê zerereke xwe ye li gor rastiyê li ber çavan îmkanên sînorkirî ji ber hestiyariya nizm. Lê belê, bi vê rêbazê pêşnîyar WHO wek aborî, herî û li erdê bi durustî nexweş zirav dayîn. Detection ji method bacteriological mycobacteria xwedî nirxekî Pêşbîniyên û texmîn derketina çawayetî bakteriyan. Çiqas bawer zêdetir ji bo ku bi ev rêbazên gerdî lêkolînên genetîk ên zirav.

çand

detection çêtir ên mycobacteria xebatên çandî nas bike. Direşand maddî Êrişkirin ku nav navîn de hêk çêkir: Mordovsky, Finn II, LJ, û weku eweyi. Tangê yên berxwedanê yên mycobacteria ji bo derman û delîlên neyekser ya bandora hejmarek ji mycobacteria û ji kolonîyên xwe li vitro, eger rêbaza serî yên çanda lêkolîn. Ji bo zêdekirina rêjeya tecrîda li ser derzîlêdanê mycobacteria yên maddî Êrişkirin li ser derdorên piralî lidarxistin.

Hevdîtina pêdiviyên gelek çandî, mîkrorganîzma di nav de alîkariya çalakiyê û şilavên. Bikaranîn, di nava vê sîstemê û automated type petorlê mezinbûna VANTES. Berhemên divê li incubation ji bo heta heft heta heşt hefteyan de pêk were. By vê demê de li zeviya ku bi nebûna mezinbûna bên hejmartin neyînî. pişkinînan maddî vejîne berazan gîneya nû, ku ji bo TB gelekî hesan dike: bi awayê herî bitesîr bo tesbîtkirina zirav Mycobacterium testa biyolojîk bifikirin.

hin kesên

enfeksiyona potansîyel - qadê balkêş yên xebatê de, ku ji aliyê Sedema enzîm re hatibû vekirin, ji bo ku li ser M. êşa zirav bû. The konsepta nûjen de yên vegirtina TB dide fikirandin ku ji sed kesan ku di têkiliyê de bi M. zirav bûn, nod-dibe ku baş çêbike, lê bi tenê deh ji wan ji nexweşiya çalak tê pêşxistin. Din jî heye ku destnedayîna TB, û ji ber ku not ji sedî ji rewşan de mikrob potansîyel, dimîne. Tesbîtkirina a pattern ew hatiye a rêbaza genetîk gerdî kir.

Geneticists dibêjin ku pêncî û pênc ji sedî ji kesên ku berhemên Êrişkirin maddî neyînî de bûn, û ji sedî heştê ji gelê hilgirtiye bi M. zirav, di heman demê de diherikin bi no yźn bimerrîn, ji nexweşî, bersivên enzîm bi erênî pêşwazî. Ev rêbazeke pişkinînan genetîk alîkariya ji bo diyarkirina nasnameya nexweş di rîskê de bi xebatên enzîm, bi encamên analîzên wan (Microscopy û çanda) e bûn negatîf, û vegirtina subclinical M. zirav amade bû.

lêkolîn modern

Federasyona Rusyayê û taqîgehan bacteriological bikaranîna rêbaza lezgîntir ji Piranîya mitleq: activity reductase nîtratê ji mycobacteria ceribandin destê reagent Griess. navendên Anti-TB bikaranîna rêbaza ku rê dide ji bo destnîşankirina berxwedana tiryakê. Ev destpêkirin di çapemeniya avî, ku automated radiometric û sîstema hisêba floransê mezinbûna mycobacteria. ji bo du hefteyan up - wisa analysis zû belav dibe.

Niha, bi rêbazên nû tên çêkirin: berxwedana tiryakê yên mycobacteria li asta Genotype di pîvandin. Study of mekanîzmayên gerdî ji genên berxwedan û amadebûna li mycobacteria dide. Ev gen bi bi berxwedanê bi dermanên hin. Ji bo nimûne, gen Kasa, inhA, katG li hemberî isoniazid, gene rpoB - genan RNA 16Sp rifampicin û rpsL - streptomycin, emb1 - ji bo ethambutol, gyrA - a fluoroquinolone û da ser.

mutasyon

Ku teşhîs modern bo xwendina DNA berbiçav zêde rêbaza astê-genetîk û destûr avabûye ji bo lêkolînên berfireh yên mutasyon di hemû Panelîst xwe. Niha em dizanin ku mutasyon herî belave li 516, 526 û 531 codons gene rpoB de, û li ser berxwedana li dermanên cuda tê. e cûrbecûr hemû rêbazên ji bo Wêrek ji mycobacteria bikaranîna ne bi tenê rêbazên ji rêûresmê heye - biochemical, yên biyolojîk û çandî, di heman demê de bi awayekî berfireh tê bikaranîn teknîkên genetîk gerdî modern. Jixwe ne têrê heye û ne rêbaza nasîna rast ji bo tespîta ji nexweşiyên monogenic. Ew li ser lêkolînên DNA de li herêma rastîn a gene taybetî ava kirin. Ev piranî pêvajoyeke aloz, sergêjî û biha ye, lê belê daneyên ku ji aliyê analîzê genetîkî gerdî pêşkêşkirin, hîn zêdetir e rasteqîne û agahdarî ji welat ji hemû analîz din.

Ev hatiye dirêj zanîn ku, DNA ne ji bo tevahiya jiyanê ji organîzmaya ku ev di ti odnakova hucreyên nucleated e nayê guhertin, û ev jî gengaz e ku mirov xwe ji analysis of bê guman hemû şaneyên bedenê de, di qonaxeke ontogeny. The gene zirar dikare berî xuyabûna nîşanên pêşî ji vê nexweşiyê klînîkî-scale full, herweha li gel heterozygous bi tendurist bên naskirin, lê belê, a mutasyon di gene. rêbazên pişkinînan nexweşiyeke irsî genetîk Molecular destûrê eşkere xwe (nêzîkatiya direct, DNA-Sedema), her weha ji bo analîzkirina nerewayî yên nexweşî di malbatê de bi DNA û destkurt de hatin şîtel (polymorphisms genetîk), ku ji nêz ve bi gene xwariye (ango, bi nêzîkatiya neyekser ya DNA-Sedema) ve girêdayî ye. Rasterast an jî nerasterast - ti Sedema DNA li ser rêbazên naskirina a, para hişk danasîn li ser DNA mirovan dispêre.

rêbazên direct

rêbazên Direct ji tespîtkirina DNA in dema ku nexweşî bi nislet gene Palme tê zanîn, wek tê zanîn, û cureyên mutasyon xwe. Ji bo nimûne, a bi rêbazên direct minasib li hejmarek ji nexweşiyên. Ev chorea Huntington da (extension CTG-dubareyên), Mirzali (R408W), fibrosis cystic (delF508, mutasyon mezin) û weku eweyi. Avantaja sereke yên rêbaza direct a rastbûna pişkinînan tevahî-firot e, û pêwîst nake ku ez a testên DNA yên din yên ku ji malbata wê derê. Eger mutasyon di gene beramberî dîtin, ew jî dihêle tam erê teşhîs yên dîtî, diyarkirina Genotype ji bo yên din yên ku ji malbata barekî giran.

Din yên teşhîs direct sûd tê hesibandin, ji bo diyarkirina nasnameya hilgirê heterozygous ji mutasyon xerab ji xizm û dê û bavên ku ji vê nexweşiyê mir. Ev yek bi taybetî ji bo nexweşiyên autosomal recessive. Dezawantajên ji rêbazên direct jî hene. Ji bo serîlêdanê ji wan re, ku divê hun bizanibin, bê tomarkirin ji gene anormal, avaniya Exon-intron ji Panelîst xwe û mutasyon xwe. Bi hemû nexweşiyên monogenic îro wiha agahî stand. rêbazên direct Informativeness ne jî li ber çav bê temam, ji ber ku yek û gene heman dikarin hejmareke mezin ji mutasyon Êrişkirin, ku dibe sedema pêşketina nexweşiyên irsiyetê re heye.

rêbazên nerasterast

rêbazên pisht li Sedema DNA bi li hemû, bi kar di rewşên din de, eger gene zirar diyarkirin ne, lê bi tenê chromosomally, an eger tespîtkirina xeta de ew di encama ne bide (ku ev pêk tê, eger gene rêxistina hevsengkirinê kompleks an dereceyekê mezin, eger ne, gelek hene mutasyon Êrişkirin). rêbazên pisht analysis nerewayî nîşaneyên polymorphic li malbata alelîkî çêkirin. Markers dîtin ku li herêma chromosomal heman an locus ji nêzîk ve bi nexweşiya girêdayî û temsîl deletions an insertions, Substitutions point, zanînê, û polymorphism wan e ji ber ku mîqdara cuda yên hucreyên di block.

Herî musaît ji bo tespîtkirina microsatellite nirxandin û minisatellite polymorphisms nerasterast, ku bi awayekî berfireh li genên mirovan belavkirin. nirxê xwe anîn ziman di naveroka agahî bilind, eger ziyan ji dûr ve genetîk di navbera marker û gene e pir mezin e ne. Di sedem nebin, rastbûna estimation e ku bi awayekî gelekî mezin de diyar frequency ji recombination di navbera barî polymorphic û zirar. rêbazên pişkinînan pisht jî gava pêşîn wêneke ji frequencies allele vê lêkolînê de nifûsa tehlîlkirin di navbera nexweş û kêmxwînî ya mutasyon, plus ku pêdivî bi biryardarî bi îhtimaleke mezin ji recombination ji nonequilibrium û sewaxê nîşandêr û alleles mutant ne.

rêbazên din

beşên kurt ji RNA an DNA, herweha gene yek visualized di bin lêkolînê de bi mîkroskopê dikare bê gotin, ji ber vê yekê, ji bo diyarkirina nasnameya mutasyon pêdivî bi nasîna genetîk gerdî. e ku "Projeya genên Mirovan", herweha pêşketina din li genetîkê, gerdî heye gelek berfireh îhtîmala yên nexweşan nexweşiyên irsiyetê - hem berî û derdikeve. Van rêbazên dikarin di zû ne û nikerin Pêşbîniyên û nexweşiyên monogenic, ku piyesa digire cihê xew. Mixabin, ji ber ku di şiyanên teknîkî yên lêkolînên genetîk gerdî carna derveyî sînorên exlaqî bi ku di têkiliyên bi mîrasa set in, bi taybetî dema ku teşhîs li baliqbûnê û zarokatiyê ye.

derasayî chromosomal binyadî û hejmarî sedemên herî normal yên nexweşî û penceşêrê, û gelek tênê in. deforme Chromosomal divê bê tespîtkirin bê, ku bo şêwirdariya malbata girîng e - ji bo nirxandina Weather, bi rîska zayinê di ducanîyên pêşerojê de. analysis Kromozom "standard zêr" teşhîs genetîkî ye, lê belê ew bi sînor e. Bi tenê bi rêbazên analîzên genetîkî gerdî zêdetir dikarin, ji ber ku bi kar klonkirina teknolojiya li labels floransê dikarin ji hestiyariya wan a bilind a ji bo diyarkirina nasnameya Guherandinên chromosomal rębazęn ku, ne gengaze ku jixweber klasîk in li wir xebatên cytogenetic. Van teknîkan her ku diçe berfireh şiyanên pişkinînan me, gava lêkolîn, zarokên bi pêşketinê, retardation derûnî, bi gelek nexwaşîyên din irsiyetê.

vebiguherin

Ev ji bo mirovahiyê pir girîng e ji tevna gene û fonksiyona ji zanînê, cureyên Jorawjorí, jêhatîbûna bo tesbîtkirina nexweşiyên irsiyetê ku di girêdanekê de bi pêşketina genetîkê, gerdî rû bûn e. rêbazên xwe bi di xebatê de ji molekulek DNA ku armanca - û normal, dema ew e, û dema ku ew xwariye. * Amadekirinê ya Rêzkirinên li acid deoxyribonucleic ji nucleotides (DNA) û lihevnekirin, di merheleyên ji distînin, mînakên ji bo diyarkirina nasnameya pariyên şexsî. Tecrîda li ser DNA genomic ku di hucreyan de, tengkirina (perçe dike), amplification (klonkirina), electrophoresis ji pariyên (veqetîne û pere electric xwe û giranîya gerdî destê gel agarose). Nasnameya pariyên hûrbûyî yên taybet li ser rûyê a stripe demdiyarkirî.

Paşê diçe nav çalakiya filtres taybetî, bi riya ku derbas hev durehîkirî nûbûnê bi bermayiyên DNA klonkirî an Yuzuncuyilê radyoaktîf sentetîk a kontrolkirina, ku ji bo her test test wekhev be. Ger tu li helwesta an length rêje bi operasiyonekê de biguhere, eger parçe nû yan jî wenda - ev hemû nîşan dide ku gene tehlîlkirin di zîndanan de hatiye nûsaziya li cihekê VY de. in, heşt teknîkên bingehîn ên xebatên genetîk gerdî hene: sequencing (Tespîtkirina cihekê DNA), bertek zincîra polymerase (zêdebûna hejmara Rêzkirinên), ji bo amadekirina astaran zanîn genan, klonkirina DNA, hilberîna ji gerdên recombinant Navdêr proteîn ji ber gerdên recombinant, afirandina a set temam (collection library) hûrbûyî yên ku bi kar û sinorkirina hatin standin klonkirî.